Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者重大突破缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次成现家兔性疾病到成现1改型肾病临床研究疼痛的重大突破率在成年人时期就有不太好的揭示，多个家兔性疾病中性的成年人除此以外70%在血清转换后10在短期内复发肾病，而随访15年的成年人这一比率增高到84%。相比之下，占临床研究1改型肾病一半以上的改型1改型肾病的发病有助于还没有得到充分的研究成果。

更为多的人开始使用分期系统来定义1改型肾病的重大突破：个基底在成现多种家兔性疾病时转至第1期中的，成现低血糖却是其时转至第2期中的，成现疼痛时转至第3期中的。一些多发家兔性疾病中性的个基底，在1期和2期，重大突破较较慢，并发展为发病的1改型肾病。我们之前揭示了一第三组在首次检测到多种家兔性疾病样本后至不算10年无肾病的却是较慢重大突破者，这第三组病患者人数不算，但相似性非常说明。随后，我们发现家兔自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞加成在重大突破却是快的病患者中的基本不假定，但在近期发病和或多或不算的肾病病患者中的很难以检测到。这可能声称，与重大突破病患者相比，这些病患者性疾病加成的调节增强。

晚期研究成果声称，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但肾病病患者假定一些特性缺陷，其中的包括对IL-2的加成能够降低。此外，肾病病患者中的的效其所CD4+T巨噬细胞可能对调节更具抵抗性，展现为效其所T巨噬细胞的诱导减弱，自然环境产生的Treg和灌注产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞中的IL-2加成减弱。本研究成果的目的是揭示了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群却是却是快重大突破者中的的相似性，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的横向研究成果，在21岁以下出院的病患者亲属中的检查1改型肾病的脆弱因素。我们之前揭示了长时间却是快重大突破者的相似性，他们始终保持多重家兔性疾病中性超过10年，但没有成现肾病的临床研究疼痛，较慢性或非同步进行性性疾病。随后，10名之前始终保持无肾病并愿意发放大量血液样本的却是快重大突破者设为T和B巨噬细胞特性数据分析。在目前的研究成果中的，8名较慢重大突破者(SP第三组)，中的位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的家兔性疾病中性。所有的行动者都始终保持1改型肾病重大突破的1期，尽管一些人随后失掉了家兔性疾病对某些抗原的中性加成，然而，一名病患者已经始终保持2期至不算6年，但没有成现临床研究疼痛，一名病患者被诊断为肾病，该受测者72岁，在挖掘成实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析中的对该小分子同步进行了单独评估。除去外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞绝技和T巨噬细胞诱导试验评估小分子中的Treg的kHz、表改型和特性。使用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)同步进行无监督聚类数据分析，评估Treg表改型。

结果：与身心健康小分子相比，来自较慢重大突破基底的无意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类显示，抑制的无意识CD4+ TregkHz增高，与糖皮质激素诱导的TNFR特别蛋白(GITR)传达增高有关。一名HbA1c升高的病患者与重大突破却是快者和匹配的比对第三组相比，Treg谱有所不尽相同。特性数据最近，与身心健康小分子相比，来自却是快重大突破基底的Treg介导的CD4+效其所T巨噬细胞诱导显着受损。展现为对效其所CD4+T巨噬细胞CD25和CD134传达的诱导增高。

左图1 深入的表改型数据分析显示，CD4+Treg亚改型在较慢重大突破队列中的增高。由FlowSOM填充的Treg室，有数在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物传达认定成10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)使用9个不尽相同Treg上面填充的10个元簇的MST。每个终端亦然一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在终端第三组周围制做。每个终端中的的饼左图说明单个上面的传达级别。(b)每个元聚类的热左图，以显示既有上面传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)填充左图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster装3](丰度> 0.05%)未确定为HD和SP第三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。浅蓝色红色亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 使用CITRUS的预测模改型证实，TregkHz的增高是重大突破却是快的上面。分级除此以外(a - f)和柑橘数据分析(g-k)更为SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的亦然性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达同步进行除去，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(白点)和SP(蓝点)第三组以及小分子SP 606(浅蓝色)中的CD25+ cd127的kHz汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外子集的装3];(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达气压着色，红色突成的簇被识别为SP和HD队列错综复杂的不尽相同。(j)装3]显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中的，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(比率)。(k)直方左图显示每个簇的表改型(蓝色)和Treg上面一般来说传达与氛围传达(蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。氛围与所有其他簇中的上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与身心健康献血者相比，重大突破却是快者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热左图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中的所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR传达并联，显示直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有小分子包括，p< 0.05(蓝色)小分子SP 606和匹配的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从分级除此以外，从所有HD(紫色)、所有SP(蓝色)和SP 606(浅蓝色)并联，显示直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自却是快重大突破的CD4+ treg巨噬细胞依靠效其所CD4+T巨噬细胞的能够降低。SP第三组用蓝色的新线和红色说明，HD第三组用银色的新线和红色说明，浅蓝色的新线/红色说明小分子sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按掩蔽的比率反应物。用抗CD3 /28微珠增殖巨噬细胞，培育3天后同步进行流式巨噬细胞绝技检测。(a-d)与CD4+接收者者一般来说其所的treg培育(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱导百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导百分比。使用中性比对(抑制的响其所巨噬细胞不含treg)计数诱导百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

左图5 效其所CD4+T巨噬细胞对却是快重大突破的T巨噬细胞增殖的诱导更敏感。SP第三组用蓝色的新线和红色说明，HD第三组用银色的新线和红色说明，浅蓝色的新线/红色说明小分子sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞同步进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按掩蔽的比率反应物。用抗CD3 /28微珠增殖巨噬细胞，培育3天后同步进行流式巨噬细胞绝技(CD25反染)和巨噬炎症数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培育。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱导前年(b)。(c,d) CD25诱导前年(c)和CD134诱导前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

结论：我们得成的结论是，来自却是快重大突破子的增殖无意识CD4+Treg在GITR传达中的得到了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1改型肾病风险个基底中的的异质性的必要性。

原意引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28